无菌作基本技术

实验进行前，无菌室及无菌作台（laminar flow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70% ethanol擦拭无菌作抬面，并开启无菌作台风扇运转10分钟后，才开始实验作。
每次作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
无菌作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70% ethanol擦拭后才带入无菌作台内。实验作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域作。
小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方作实验。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70% ethanol擦拭无菌作台面。作间隔应让无菌作台运转5-10分钟后，再进行下一个细胞株之作。
工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心作，并选择适当等级之无菌作台（至少Class II）。作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
CO2培养箱：
1. 细胞培养是否需二氧化碳供应，依细胞培养基种类而异。
2. 若细胞培养基以碳酸盐为pH缓冲系统，则需补充二氧化碳以达到缓冲作用，应培养细胞于二氧化碳环境下，例如使用二氧化碳培养箱（常用之比例为5% CO2,95% air），或是灌入适量二氧化碳至培养容器内，放入一般培养箱中培养即可。为使二氧化碳能够流通，培养瓶（例如T-flask）放入二氧化碳培养箱时应松开瓶盖，或使用透气瓶盖。取出观察时，则关紧瓶盖，以避免污染。
3. 若细胞培养基含有其他缓冲物质而不需二氧化碳供应，则放在一般培养箱中培养即可。
4. 培养箱内可放置水盘以维持适量之溼度，避免因培养基蒸发造成盐类浓度之变化而影响细胞生长。
定期检测下列项目：
1. 无菌作台：注意airflow压力，定期更换紫外线灯管、HEPA过滤膜及prefilter预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。
2. CO2培养箱：CO2浓度、温度、及水盘是否有污染。
3. CO2钢瓶：CO2压力
4. 恒温水槽：定期换水

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标签：无菌实验操作

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