1.作原理：
- 使用直接培养法，将测试样品接种于适当之微生物培养基中，于培养箱培养后，观察微生物培养基是否产生变化或出现菌落， 用以检测细菌与霉菌之污染。
- 测试之微生物包括细菌〈好氧与厌氧菌〉、酵母菌与霉菌。
- 使用之微生物培养基与测试菌类如表一所示。 其中trypticase soy broth、brain heart infusion broth、blood agar及 thioglycollate medium 可以广泛侦测细菌污染，Sabouraud dextrose broth、YM broth 及 nutrient broth with yeast extract 可以侦测霉菌污染， 可依实际需要而选择数种培养基测试之。 表一、微生物培养基种类
- 除了接种至微生物培养基外，亦可以在显微镜下直接观察测试样品是否有微生物污染，或是取样测试样品作染色观察。
2. 材料：
- 微生物培养基
- Trypticase soy broth
- Brain heart infusion (BHI) broth
- Blood agar plates
- Thioglycollate medium
- Sabouraud dextrose broth
- YM broth
- Nutrient broth with 2% yeast extract
- 厌氧缸及厌氧试剂
- 附盖玻璃试管〈16 x 100 mm〉
- 无菌培养皿
3. 培养基配制：
- Trypticase soy broth （Difco 0370-17-3）：称取 30 g 粉末溶于1000 ml水中，分装10 ml 至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- Brain heart infusion （BHI） broth （Difco 0037-17）：称取37 g 粉末溶于1000 ml水中，分装10 ml至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- Thioglycollate medium （Difco 0256-17-2）：称取29.8 g 粉末溶于1000 ml水中，加热至沸腾使其完全溶解，分装10 ml至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- Sabouraud dextrose broth （Difco 0382-17-9）：称取30 g 粉末溶于1000 ml水中，分装10 ml 至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- YM broth （Difco 0711-01）：称取21 g 粉末溶于1000 ml水中，分装10 ml 至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- Nutrient broth （Difco 003-01） with 2% yeast extract （Difco 0127-01）：称取8 g nutrient broth与20g Bacto yeast extract粉末溶于1000 ml水中，分装10 ml 至有盖玻璃试管中，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- Blood agar plates
- 称取40 g blood agar base（Difco 0045-01） 溶于950 ml水中，加热使其溶解，高压蒸汽灭菌121°C、15lb、15分钟。
- 待温度降低至50°C，加入5% （50ml） 无菌去凝血纤维之兔血或羊血，混合均匀，分装至培养皿，贮存于4°C。
- 亦可使用已配制好之培养基：Blood agar plate（BBL-4321261，trypticase soy agar with 5% sheep blood）
4. 测试样品：
- 样品种类包括冷冻细胞、培养中之细胞、测试血清、培养基或其他细胞样品等。 若为培养中之细胞，须至少三天以上未更换培养基。 若为悬浮型细胞，可直接取样细胞悬浮液。 若为吸附型细胞，取样前先吸除大部分培养基，并刮下少许吸附之细胞与剩余之3-5 ml 培养基混合后，才进行取样。
- 测试样品应不含抗生素，以避免影响测试结果。 若测试样品含有抗生素《例如冷冻细胞或培养细胞》，则将收集之细胞悬浮液以离心处理或再用不含抗生素之培养基洗涤3次，以移除任何残留之抗生素。
5. 步骤：
- 分别接种测试样品至液体微生物培养基与blood agar plate。
- 液体微生物培养基：取样约 0.1~1 ml 测试样品，分别接种至 2 管液体微生物培养基中，然后分别置于37°C 培养箱与室温〈20°C~30°C〉下培养14~21天。
- Blood agar plate：取样约0.2 ml测试样品，分别接种至2个agar plate上，其中一个blood agar plate置于厌氧缸中，加入厌氧试剂后置于37°C培养箱培养14天。 另一个 blood agar plate 则直接置于37°C 培养箱培养14天。
6. 结果判读：
- 阳性反应：
- 液体培养基：呈现混浊或丝状悬浮物，可在显微镜下观察细菌、酵母菌或霉菌之出现。
- blood agar plate：出现菌落。
- 阴性反应：液体培养基没有混浊或丝状悬浮物，且 blood agar plate 没有菌落产生。
7. 参考数据：
Hay, R.J., Caputo, J., and Macy, M.L. Quality control methods for cell lines, second edition. American Type Culture Collection, Manassas, Virgina.