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酶标仪的工作原理以及酶标仪的分类

  酶标仪(ELISA)是一种常用的实验方法,用于检测和分析样品中特定物质的存在和浓度。它基于酶与其底物之间的特异性相互作用,在酶催化下生成可测量的信号。

  酶标仪的工作原理如下:

  1. 固相试验:首先,在酶标板或其他固体支持基质上涂覆反应物(例如抗体或抗原)以固定样品中的目标物质。

  2. 样品加入:将含有待测物质的样品加入到涂有反应物的酶标板中,样品中的目标物质与固定在酶标板上的反应物发生特异性结合。

  3. 洗涤:通过洗涤去除未结合的样品成分,使只有特异性结合的复合物保留在酶标板上。

  4. 二级抗体结合:加入与目标物质结合的二级抗体,这个二级抗体上结合有酶(通常是辣根过氧化物酶HRP)。

  5. 再次洗涤:洗涤去除未结合的二级抗体,只保留特异性结合的复合物在酶标板上。

  6. 底物加入:加入与酶结合产生可测量信号的底物,底物被酶催化后生成可检测的产物(通常是有色或荧光物质)。

  7. 信号检测:使用光学方法(如分光光度计或荧光仪)测量产生的信号强度,该信号与样品中目标物质的浓度成正比。

  根据酶标仪的测量原理和功能,可以将其分为以下几类:

  1. 光度酶标仪(Photometric ELISA):通过测量产生的有色产物的吸光度变化来定量分析目标物质的浓度。常用于测定蛋白质、抗体等。典型的光度酶标仪有分光光度计和ELISA读板机。

  2. 荧光酶标仪(Fluorometric ELISA):通过测量荧光产物的强度来定量分析目标物质的浓度。相比光度法,荧光法具有更高的灵敏度和特异性。常用于分子探针标记的核酸和蛋白质的检测。典型的荧光酶标仪有荧光分光光度计和荧光读板机。

  3. 放射酶标仪(Radioactive ELISA):使用放射性同位素作为检测信号的酶标仪。通过测量样品中放射性同位素的衰减来定量分析目标物质的浓度。由于放射性材料具有较高的危险性,该方法已经逐渐被其他非放射性方法取代。

  4. 酶免疫测定仪(Enzyme Immunoassay Analyzer):使用多通道的酶标仪,可同时处理多个样品。这种酶标仪可以自动化操作,提高实验的效率和准确性。酶免疫测定仪可以根据具体需要选择光度、荧光或放射性检测方式。

  5. 分子诊断酶标仪(Molecular Diagnostics Analyzer):这种酶标仪主要用于分子诊断领域,用于快速检测病原体的核酸。它可以通过PCR或其他核酸扩增技术将目标核酸扩增后与探针结合,再使用荧光或放射性信号进行检测。

  总之,酶标仪是一种常用的实验方法,根据不同的测量原理和功能,可以进行光度、荧光、放射性、自动化分析以及分子诊断等不同类型的检测。这些分类的酶标仪具有各自的优缺点和适用范围,科学家可以根据实验需求选择合适的仪器来进行实验。

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标签:酶标仪
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